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PCR檢測試劑盒的檢驗方法介紹

更新時間:2021-12-22      點擊次數(shù):364
       PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進(jìn)行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。
  PCR檢測試劑盒檢驗方法:
  1.試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))
 ?。?)從冰箱中取出試劑盒,從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
 ?。?)核算當(dāng)次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當(dāng)次實驗所需要的各種試劑量。
 ?。?)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。
  2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))
  用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。
  3.加樣
  在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標(biāo)本RNA各5μL、終體積25μL/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25μL/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
  4.PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))
  取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。
  以上就是PCR檢測試劑盒的檢驗方法,希望能對您有所幫助
  

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